چه چیزی برای ترکیب سلول های هیبریدوما استفاده می شود؟
فناوری هیبریدوما یکی از روش های اصلی برای تهیه آنتی بادی های مونوکلونال است. کلید این است که سلول های B ایمنی را با سلول های میلوما ترکیب کنیم تا سلول های هیبریدوما تشکیل دهند. این مقاله یک تجزیه و تحلیل ساختاری در مورد روشهای همجوشی، معرفهای کلیدی و روشهای عملیاتی سلولهای هیبریدوما انجام میدهد و مقایسههای دادههای مربوطه را ضمیمه میکند.
1. روش های اصلی همجوشی سلول های هیبریدوما
| روش فیوژن | اصل | مزایا | محدودیت ها |
|---|---|---|---|
| همجوشی با واسطه PEG | پلی اتیلن گلیکول غشاهای سلولی را بی ثبات می کند | هزینه کم و عملیات ساده | سرعت همجوشی کم است (حدود 1×10-5) |
| روش الکتروفیوژن | پالس های ولتاژ بالا غشاهای سلولی را سوراخ می کنند | راندمان فیوژن بالا (تا 80%) | تجهیزات گران هستند و الزامات فنی بالا هستند |
| همجوشی با واسطه ویروس | ویروس سندای همجوشی غشا را القا می کند | فرآیند همجوشی طبیعی | خطرات ایمنی زیستی، تکرارپذیری ضعیف |
2. مقایسه عملکرد معرف های رایج
| نوع معرف | محصولات معمولی | تمرکز | زمان اقدام |
|---|---|---|---|
| محلول PEG | PEG1500 | 50% (w/v) | 1-2 دقیقه |
| بافر الکتروفیوژن | محلول مانیتول | 0.3M | زمان نبض 10μs |
| رسانه غربالگری | کلاه متوسط | 1× | آموزش مداوم |
3. مراحل کلیدی فرآیند عملیات
1.پیش درمان سلولی: سلول های طحال ایمنی و سلول های میلوما به نسبت 5:1 مخلوط شده و برای حذف پروتئین های سرم سانتریفیوژ می شوند.
2.واکنش همجوشی: برای افزودن تدریجی محلول PEG از روش سانتریفیوژ گرادیان استفاده کنید و زمان واکنش را در حمام آب 37 درجه سانتی گراد به دقت کنترل کنید.
3.فرهنگ انتخابی: از محیط HAT (حاوی هیپوگزانتین-آمینوپترین-تیمیدین) برای غربالگری سلول های هیبریدوما استفاده کنید.
4.فرهنگ کلونال: رده های سلولی مونوکلونال را با روش رقت محدود به دست آورید و ترشح آنتی بادی را با الایزا تشخیص دهید.
4. جهت بهینه سازی فنی
| بهینه سازی ابعاد | اقدامات خاص | اثر مورد انتظار |
|---|---|---|
| راندمان فیوژن | بهینه سازی پارامترهای میدان الکتریکی پالسی | به بیش از 85 درصد افزایش یافته است |
| فعالیت سلولی | آنتی اکسیدان ها را اضافه کنید | میزان بقا 30 درصد افزایش یافته است |
| سرعت غربالگری | برداشت خودکار کلون | کاهش 50 درصدی ساعات کاری |
5. آخرین روند در صنعت (نقاط داغ در 10 روز گذشته)
1. آخرین گزارش در "پروتکل های طبیعت" نشان می دهد که راندمان تشکیل هیبریدوم می تواند با استفاده از فناوری همجوشی تراشه های میکروسیال از 90٪ فراتر رود.
2. یک شرکت بیولوژیکی شانگهای نوع جدیدی از ابزار الکتروفیوژن را عرضه کرد. طراحی شکل موج ثبت شده آن نرخ مرگ سلولی را زیر 5 درصد کنترل می کند.
3. فن آوری ویرایش ژن CRISPR برای تبدیل رده های سلولی میلوما به کار گرفته شده است و به طور قابل توجهی پایداری ترشح آنتی بادی را بهبود می بخشد.
به طور خلاصه، فناوری همجوشی سلول هیبریدوما به سمت راندمان و استانداردسازی بالا در حال توسعه است. محققان باید بین روش سنتی PEG و فناوری الکتروفیوژن نوظهور بر اساس نیازهای تجربی و شرایط تجهیزات، انتخاب معقولی داشته باشند.
جزئیات را بررسی کنید
جزئیات را بررسی کنید
fa
